6 bons motivos para quantificar o DNA nos seus experimentos

Por que saber exatamente quanto DNA você tem é fundamental para o sucesso dos seus experimentos? Confira:

1. Tempo

Economize tempo, evitando ter que repetir experimentos

Sem quantificar seu DNA, como você pode ter certeza de que está realizando seu estudo com a mesma quantidade de material genético? Sempre usar o mesmo volume de amostra não garante a introdução da mesma quantidade de DNA no tubo. A probabilidade de obter o mesmo rendimento a cada nova extração é relativamente baixa. Conseqüentemente, sem conhecer a concentração de DNA da sua amostra, a quantidade introduzida em cada teste não é garantida e você pode ser forçado a repetir suas manipulações.

2. Reprodutibilidade

Seja reprodutível usando sempre a mesma quantidade de DNA em suas aplicações

Muitos fatores devem ser levados em consideração na pesquisa. Use reagentes confiáveis e de qualidade para ajudá-lo a validar seus resultados. Além disso, você precisa garantir que a concentração do seu DNA não seja variável. Para determinar sua concentração de DNA com especificidade e precisão, é preferível quantificar com marcadores fluorescentes que se ligam ao DNA, pois a medição de absorbância por espectrofotometria fornece uma estimativa menos precisa.

3. Eficiência

Garanta que a quantidade de DNA será suficiente para conduzir seu estudo

Repetir suas manipulações porque algumas coisas não funcionam é muito frustrante. É uma perda de tempo precisar extrair um novo estoque de DNA para concluir um estudo. A quantificação precisa do seu DNA purificado permitirá estimar a montante o número de testes que podem ser realizados e, assim, evitar a necessidade de refazer uma etapa de extração adicional. Você obterá seus resultados mais rapidamente e liberará mais tempo para análise..

4. Diluição

Descubra se sua amostra está muito diluída antes de realizar seus experimentos

Às vezes, extrair DNA de certos tipos de amostras pode ser problemático. Isso significa que o desempenho pode ser diferente do que você espera. Alguns métodos não são sensíveis o suficiente para fornecer um valor exato do DNA obtido. O método de absorbância pode teoricamente detectar 2ng / µl em uma amostra perfeitamente pura. Certos métodos mais sensíveis são capazes de medir concentrações de DNA da ordem de 0,5 ng / ml. Enquanto alguns experimentos trabalham com níveis muito baixos de DNA, outros exigem quantidades maiores. Portanto, é importante conhecer com precisão sua concentração de DNA antes de iniciar seu experimento.

5. Tipo de DNA

Fita simples ou dupla

Em algumas aplicações, é importante saber se você está usando DNA de fita simples ou dupla. Mesmo se você usar um protocolo de extração que favorece um ou outro, o ensaio de absorbância não distingue os dois formatos de DNA. Para isso, existem marcadores fluorescentes que permitem quantificar especificamente o DNA de fita simples ou dupla. Use o QuantiFluor® ssDNA System para fita simples, ou o QuantiFluor® ONE dsDNA System para fita dupla.

6. Tipo de material

Certifique-se de que está medindo DNA e não RNA ou proteínas

A absorbância a 260 nm não detecta só DNA. Muitos compostos orgânicos, proteínas e contaminantes da extração, como fenol e outros ácidos nucléicos (RNA, ssDNA e primers), também aparecem. Portanto, quando comparado à fluorimetria, você tenderá a superestimar sua concentração de DNA. Usando um marcador fluorescente com uma curva padrão de 2 pontos, como o sistema dsDNA Quantifluor One com um fluorímetro Quantus, você será capaz de quantificar com precisão sua concentração de DNA com o mínimo de interferência de contaminantes.

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