CellTiter 96® AQ_ueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay (MTS)

O ensaio de proliferação celular não radioativo CellTiter 96® AQueous é um método homogêneo e colorimétrico para determinar o número de células viáveis em ensaios de proliferação, citotoxicidade ou quimiossensibilidade. O ensaio é composto por soluções de um novo composto de tetrazólio [3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-5-(3-carboximetilxifenil)-2-(4-sulfofenil)-2H-tetrazólio, sal interno; MTS] e um reagente de acoplamento de elétrons (metossulfato de fenazina) PMS. O MTS é biorreduzido pelas células em um produto formazan que é solúvel no meio de cultura de tecidos. A absorbância do produto formazan a 490nm pode ser medida diretamente em placas de ensaio de 96 poços sem processamento adicional. A conversão do MTS no produto formazan solúvel em água é realizada por enzimas desidrogenase encontradas em células metabolicamente ativas. A quantidade de produto formazan, medida pela quantidade de absorbância de 490 nm, é diretamente proporcional ao número de células vivas na cultura.

Se você usa atualmente um ensaio de incorporação de [3H]-timidina, a adição da solução combinada de MTS/PMS pode ser substituída por [3H]-timidina no momento do ensaio em que o pulso de timidina radioativa é normalmente adicionado. Os dados dos bioensaios de proliferação que comparam o CellTiter 96® AQueous Assay e a incorporação de [3H]-timidina mostram resultados semelhantes. Isso está de acordo com estudos semelhantes de incorporação de radioatividade realizados com o ensaio CellTiter 96® original.

Recursos e benefícios

Um ensaio fácil de usar, basta combinar as soluções de MTS e PMS fornecidas, adicionar às células, incubar e ler a absorbância. O ensaio é rápido e pode ser realizado em uma placa de 96 poços sem lavagem ou coleta de células. A eliminação das etapas de solubilização, pois o produto MTS formazan é solúvel no meio de cultura de tecidos, também economiza tempo. Como se trata de um ensaio não radioativo, não é necessário coquetel de cintilação nem descarte de resíduos radioativos (ao contrário da [3H]-timidina), o que proporciona flexibilidade. Ao contrário do ensaio MTT, as placas podem ser lidas e devolvidas a uma incubadora para posterior desenvolvimento da cor, proporcionando um fluxo de trabalho flexível.