CellTiter 96® AQ_ueous One Solution Cell Proliferation Assay (MTS)

O ensaio de proliferação celular CellTiter 96® AQueous One Solution é um método colorimétrico para determinar o número de células viáveis em ensaios de proliferação, citotoxicidade ou quimiossensibilidade. O CellTiter 96® AQueous One Solution Reagent contém um composto de tetrazólio [3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-5-(3-carboximetilxifenil)-2-(4-sulfofenil)-2H-tetrazólio, sal interno; MTS] e um reagente de acoplamento de elétrons (fenazina etosulfato; PES). O PES tem maior estabilidade química, o que permite que ele seja combinado com o MTS para formar uma solução estável.

Os ensaios são realizados adicionando uma pequena quantidade do reagente CellTiter 96® AQueous One Solution diretamente aos poços de cultura, incubando por 1 a 4 horas e, em seguida, registrando a absorbância a 490 nm com um leitor de placas de 96 poços. A quantidade de produto formazan, medida pela quantidade de absorbância a 490 nm, é diretamente proporcional ao número de células vivas na cultura.

Se você usa atualmente um ensaio de incorporação de [3H]-timidina, a adição do reagente CellTiter 96® AQueous One Solution pode ser substituída pelo pulso de [3H]-timidina no momento do ensaio em que o pulso de timidina radioativa é normalmente adicionado. Dados de bioensaios anteriores comparando a incorporação de [3H]-timidina com o ensaio CellTiter 96® AQueous baseado em MTS e o ensaio CellTiter 96® original baseado em MTT demonstram que os reagentes de tetrazólio podem ser substituídos pela incorporação de [3H]-timidina.

Recursos e benefícios

O formato simples de "adicionar-incubar-medir" (adição de reagente em uma única etapa) permite a criação de ensaios de triagem homogêneos de alto rendimento. Diferentemente do MTT, o ensaio pode ser usado como uma solução única, esterilizada por filtro e pronta para ser adicionada às placas de ensaio. São necessárias menos etapas, pois o ensaio pode ser realizado em placas de 96 poços sem etapas de lavagem ou de coleta de células. Além disso, as etapas de solubilização normalmente necessárias para os ensaios de MTT são eliminadas.

O ensaio oferece flexibilidade, pois as placas podem ser lidas e devolvidas a uma incubadora para maior desenvolvimento da cor e, com a eliminação do solvente orgânico volátil para solubilizar o produto formazan e os reagentes radioativos normalmente exigidos em ensaios semelhantes, o CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay é mais seguro de usar.