Ensaio de viabilidade celular CellTiter-Glo® 3D

Como Funciona o CellTiter-Glo 3D?

O ensaio de viabilidade celular CellTiter-Glo® 3D foi projetado para determinar a viabilidade celular em esferóides de microtecidos 3D. O reagente do ensaio penetra em grandes esferóides e tem maior capacidade lítica, permitindo a determinação mais precisa da viabilidade em comparação com outros métodos de ensaio.

Com base na mesma química confiável do ensaio CellTiter-Glo® clássico, esse novo reagente de ensaio 3D mede o ATP como indicador de viabilidade e gera uma leitura luminescente muito mais sensível do que os métodos colorimétricos ou baseados em fluorescência. O protocolo simples, de 30 minutos, e o reagente pronto para uso permitem resultados rápidos.

Saiba como o Ensaio de Viabilidade Celular CellTiter-Glo® 3D pode ser usado para avaliar a toxicidade de medicamentos em organoides.

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Melhor Recuperação de ATP em Esferoides de Microtecidos 3D Maiores

Diameter of Spheroid (μm)	Classic CellTiter-Glo® Assay (pmol/microtissue)	CellTiter-Glo® 3D Assay (pmol/microtissue)	Ratio
188	16 ± 4	17 ± 4	1.10
386	79 ± 3	94 ± 11	1.19
459	103 ± 2	126 ± 11	1.22
565	127 ± 3	178 ± 17	1.40

Melhor Capacidade Lítica

Penetração aprimorada de microtecido 3D, dados de viabilidade mais precisos
Os esferoides de câncer de cólon HCT116 foram gerados pela semeadura de células na plataforma de gota suspensa de 96 poços InSphero GravityPLUS™ e cultivados por 4 dias.

Painel A. Um volume equivalente de reagente foi adicionado a todas as amostras e, após 5 minutos de agitação, a luminescência foi registrada aos 30 minutos.

Painel B. Uma concentração 2X de CellTox™ Green Dye foi adicionada ao CellTiter-Glo® 3D Reagent (à esquerda) ou ao ATPlite™ 1Step Reagent (à direita) antes da adição da amostra como um indicador de lise celular e as imagens foram adquiridas em 30 minutos. Os esferóides no Painel B têm cerca de 300μm de diâmetro, e as barras em cada imagem representam uma distância de 200μm.

CellTiter-Glo 3D Culture & Better Lytic Capacity

Mais Sensível que os Ensaios de Viabilidade Celular Colorimétricos ou Fluorométricos

Os sinais luminescentes do Ensaio CellTiter-Glo® 3D são ordens de magnitude acima do fundo. Outros ensaios de viabilidade não-lítica que medem alterações na fluorescência (por exemplo, alamarBlue®) ou na absorbância (por exemplo, MTT) geram sinais que são apenas modestamente superiores aos sinais de controle sem células.

Sensitivity & CellTiter-Glo 3D Cell Culture — InSphero Insight™ human liver microtissues (~250μm). All microtissues were assayed using the CellTiter-Glo® 3D, alamarBlue® and MTT assays according to manufacturer's protocols. Total assay times for the CellTiter-Glo® 3D, alamarBlue® and MTT assays were 30 minutes, 3 hours and 8 hours, respectively.

Sensitivity & CellTiter 3D Spheroid Assay Reagent — HCT116 colon cancer cells seeded into an InSphero GravityPLUS™ 96-well hanging-drop platform and grown to generate ~340μm spheroids.

Compatível com uma Variedade de Métodos de Cultura 3D

Os resultados da triagem de compostos usando o ensaio CellTiter-Glo® 3D em culturas 3D de gota suspensa, placa de fixação ultrabaixa (ULA) e Matrigel® são mostrados abaixo. Foram obtidos resultados equivalentes para todos os três métodos.

3D Cell Culture Spheroid Assay Hanging Drop Method

3D Cell Culture Spheroid Assay Reagent Matrigel

HCT116 colon cancer cells were seeded as follows: 400 cells in hanging-drop; 1,000 cells in ULA or Matrigel®. Microtissues were grown for 4 days, treated with compounds for 48 hours, and then assayed with the CellTiter-Glo® 3D Reagent. Luminescence was recorded at 30 minutes.

O Ensaio CellTiter-Glo® 3D Demonstra Excelente Precisão

Experimento do fator Z'com microtecidos 3D

Quatrocentas células de câncer de cólon HCT116 foram semeadas em cada um dos 60 poços de uma placa de gota suspensa InSphero GravityPLUS™ de 96 poços e incubadas por 4 dias para formar 60 esferoides (~350μm de diâmetro). Metade dos esferoides foi tratada com panobinostat 100μM (quadrados pretos) e a outra metade foi tratada com veículo (DMSO 1%, quadrados laranja). Após 48 horas, todas as amostras foram testadas com o CellTiter-Glo® 3D Reagent. O ensaio CellTiter-Glo® 3D forneceu um fator Z de 0,81.

CellTiter-Glo 3D Culture & Spheroid Assay Precision

Tools to Monitor Biology in 3D Culture

When working with 3D culture models, choosing the right assay system is crucial. Learn about tools to monitor biology in 3D culture.

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CellTiter-Glo® 3D Cell Viability Assay Technical ManualPDF (1749 KB) – English

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FB258 CellTiter-Glo 3D Cell Viability AssayPDF (556 KB) – English

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Item	Código	Tamanho
CellTiter-Glo® 3D Reagent	G968A	1 × 10ml

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Citations

Effect of Spheroidal Age on Sorafenib Diffusivity and Toxicity in a 3D HepG2 Spheroid Model.

--
2019 Sci. Rep.
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Frequentemente usado com

ROS-Glo™ H₂O₂ Assay

Sensitive, bioluminescent assay that measures the level of H₂O₂ in cell cultures.

G8820, G8821

GloMax® Discover System

High-performance microplate reader for detecting luminescence, fluorescence and absorbance.

GM3000

CellTiter-Glo® 3D Cell Viability Assay

Part Numbers: G9681, G9682, G9683

A Cell Viability Assay Validated for 3D Microtissue Cultures

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