Ensaios de Estresse Oxidativo

O estresse oxidativo ocorre quando há um aumento na produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) ou uma diminuição na eficácia das defesas antioxidantes celulares. As células geram ROS como resultado do aumento do metabolismo ou de uma resposta ao estresse. A glutationa, um antioxidante, é usada para atenuar os danos causados pelas EROs. Os ensaios para determinar o estresse oxidativo podem medir os níveis de espécies reativas tóxicas de oxigênio ou os níveis de antioxidantes celulares.

A glutationa é um antioxidante encontrado em células eucarióticas, na maioria das vezes na forma reduzida (GSH). Uma pequena parte da glutationa celular está no estado oxidado (GSSG). A GSSG é um excelente indicador de estresse oxidativo nas células. 

O ensaio GSH/GSSG-Glo™ é um sistema baseado em luminescência usado para detectar e quantificar a glutationa nos estados oxidado e reduzido. A luminescência estável é produzida pela conversão da luciferina-NT, uma sonda de GSH, em luciferina por uma enzima glutationa S-transferase. Essa conversão em luciferina é acoplada a uma reação de luciferase de vaga-lume que produz um sinal luminescente proporcional à quantidade de GSH presente.

As espécies reativas de oxigênio (ROS) são moléculas quimicamente reativas que contêm oxigênio. Elas são benéficas para a célula como subprodutos naturais do metabolismo e têm funções na sinalização celular, mas também podem levar a danos celulares e estresse oxidativo. Altas taxas de proliferação estão ligadas a um aumento de ROS. Como várias EROs são convertidas em H2O2 na célula, e o H2O2 é a ERO de vida mais longa, um aumento no H2O2 pode refletir um aumento geral nos níveis de EROs celulares. O ensaio ROS-Glo™ usa um substrato que reage diretamente com o H2O2 para gerar um sinal luminescente proporcional ao nível de H2O2 presente.