GDP-Glo™ Glycosyltransferase Assay

Part Numbers: VA1090, VA1091, VA1092, VA1093, VA1094, VA1095, VA1096

Universal Glycosyltransferase Activity Assay

  • Easy, "add-incubate-read" protocol
  • Detects any glycosyltransferase that uses GDP-sugar as a substrate
  • Ideal for low-activity glycosyltransferases

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Código selecionado: VA1090

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GDP-Glo™ Glycosyltransferase Assay

Um Ensaio Simples e Bioluminescente para Atividade de Glicosiltransferase

O ensaio GDP-Glo™ Glycosyltransferase é um método homogêneo de adição de reagente único para detectar rapidamente a formação de GDP em reações de glicosiltransferase. Após a reação de glicosiltransferase, um volume igual de reagente de detecção de GDP é adicionado para converter simultaneamente o produto GDP em ATP e gerar luz em uma reação de luciferase. A luz gerada é detectada por meio de um luminômetro, e a saída de luz é proporcional à concentração de GDP de baixo nM a 25μM. A luminescência pode ser correlacionada à concentração de GDP usando uma curva padrão de GDP.

Adicionar-Misturar-Ler para Obter Resultados

Comece com enzimas purificadas, doadores de açúcar e moléculas aceitadoras, e você poderá detectar o produto da reação de glicosiltransferase GDP. Basta adicionar o reagente de detecção de GDP e medir a luminescência.

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Funciona com a Maioria das Glicosiltransferases

O Ensaio GDP-Glo™ pode ser usado para medir a atividade de praticamente qualquer glicosiltransferase que use GDP-açúcar como substrato. Aqui, analisamos as fucosiltransferases envolvidas na exibição de antígenos em células imunológicas.

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Detecta Quantidades Nanomolares Baixas de GDP; Ideal para Glicosiltransferases de Baixa Atividade

A sensibilidade do ensaio GDP-Glo™ Glycosyltransferase significa que ele pode detectar baixas concentrações de GDP com alta faixa dinâmica. Portanto, seja no ensaio de uma glicosiltransferase de baixa atividade cuja taxa de transferência de açúcar é baixa ou usando uma baixa concentração de enzima que produz uma pequena quantidade de GDP, é possível obter uma alta relação sinal-fundo usando o ensaio.

Os dados abaixo mostram a linearidade e a sensibilidade do ensaio GDP-Glo™ Glycosyltransferase. Aqui, uma curva padrão de GDP foi preparada na faixa de concentração indicada em 25 µl de tampão de reação de glicosiltransferase 1X em uma placa branca sólida de 96 poços. O ensaio GDP-Glo™ Glycosyltransferase foi realizado com 25 µl de reagente de detecção de GDP em temperatura ambiente. A luminescência foi registrada usando um luminômetro GloMax®. Os valores representam a média de quatro réplicas. A tabela mostra a luminescência medida 1 hora após a adição do Reagente de Detecção de GDP e a relação sinal-fundo calculada para cada concentração da curva padrão.

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O Sinal Luminescente é Estável por Várias Horas

O ensaio GDP-Glo™ gera um sinal luminescente altamente estável por mais de 3 horas, o que o torna conveniente para o processamento em lote de várias placas de ensaio.

Os dados aqui apresentados mostram que o sinal obtido com o Ensaio GDP-Glo™ é estável por várias horas. Para determinar a estabilidade do sinal, a luminescência foi registrada 1 e 3 horas após a adição do reagente de detecção. A relação sinal/plano de fundo não se alterou durante o tempo medido (dados não mostrados). RLU = unidades de luz relativas.

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Especificações

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Item Código Tamanho

ATP Detection Substrate

V363C 1 × 1 vial

Nucleotide Detection Buffer

V696A 1 × 5ml

Enzyme Dilution Buffer

V773A 1 × 1.5ml

GDP, 10mM

VA111A 1 × 100μl

GDP-Glo™ Enzyme

VA112A 1 × 20μl

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ATP Detection Substrate

V363A 1 × 1 vial

Nucleotide Detection Buffer

V696B 1 × 10ml

Enzyme Dilution Buffer

V773A 2 × 1.5ml

GDP, 10mM

VA111A 1 × 100μl

GDP-Glo™ Enzyme

VA112B 1 × 40μl

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V363B 1 × 1 vial

Nucleotide Detection Buffer

V696C 1 × 100ml

Enzyme Dilution Buffer

V773B 1 × 15ml

GDP, 10mM

VA111A 1 × 100μl

GDP-Glo™ Enzyme

VA112C 1 × 200μl

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V363C 1 × 1 vial

Nucleotide Detection Buffer

V696A 1 × 5ml

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GDP, 10mM

VA111A 1 × 100μl

GDP-Glo™ Enzyme

VA112A 1 × 20μl

GDP-Fucose

VA109A 1 × 50μl 50mM View Product

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GDP, 10mM

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GDP-Glo™ Enzyme

VA112B 1 × 40μl

GDP-Fucose

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Nucleotide Detection Buffer

V696A 1 × 5ml

Enzyme Dilution Buffer

V773A 1 × 1.5ml

GDP, 10mM

VA111A 1 × 100μl

GDP-Glo™ Enzyme

VA112A 1 × 20μl

GDP-Mannose

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Nucleotide Detection Buffer

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GDP, 10mM

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GDP-Glo™ Enzyme

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