Detecção Luminescente da Atividade da Protease
O ensaio GloSensor™ Protease é usado para monitorar a atividade da protease in vitro e in vivo. A abordagem utiliza formas circularmente permutadas de luciferase em que os terminais N e C do tipo selvagem são ligados a um peptídeo que contém um local de clivagem de protease. Uma vez clivada pela protease correspondente, uma restrição conformacional é eliminada, resultando em grandes aumentos na atividade de luminescência. Peptídeos contendo sítios de clivagem de protease de até 20 aminoácidos de comprimento foram validados in vitro, usando essa tecnologia, incluindo proteases que exigem resíduos P' para uma clivagem eficiente.
Um novo construto de protease GloSensor™, o plasmídeo 30F, foi desenvolvido para ensaios de células vivas e não-líticos de atividade de protease para uso em cultura de células e modelos in vivo. Quando projetado com um local de clivagem da caspase-3/7, o biossensor GloSensor™ caspase 3/7 permite uma abordagem sensível e em tempo real para a detecção da atividade da caspase-3/7, possibilitando um método para a medição in vivo da apoptose em modelos animais. O biossensor GloSensor™ caspase 3/7, juntamente com uma construção semelhante projetada para detectar a granzima B, também foi usado para a detecção da apoptose de células-alvo mediada por linfócitos T citotóxicos (CTLs) derivados in vitro ou ex vivo. Você pode ler mais sobre esse trabalho no artigo: Um ensaio em tempo real da atividade da caspase-3/7 em cultura de células e modelos animais.
O plasmídeo biossensor GloSensor™ caspase 3/7, as linhas de células estáveis e os plasmídeos biossensores de granzima estão disponíveis como materiais de ensaio personalizados. Esses plasmídeos biossensores podem ser usados diretamente ou modificados pela inserção de novos locais de clivagem para criar biossensores para uma protease específica de interesse.