Clonagem e marcadores de DNA
As ferramentas que modificam os ácidos nucleicos fornecem a base para muitas técnicas de biologia molecular, como a subclonagem. Para a clonagem convencional de fragmentos de DNA, fornecemos uma variedade de enzimas de restrição e T4 DNA Ligase. Para a transformação bacteriana, oferecemos uma seleção de células competentes, incluindo a nossa estirpe única Single Step KRX.
Para outras aplicações de clonagem, oferecemos T4 DNA kinase, fosfatase alcalina de vitelo e outras enzimas modificadoras. Para a transcrição de RNA, estão disponíveis as polimerases de RNA T7, SP6 e T3.
Uma variedade de marcadores de DNA/RNA, incluindo escadas de bancada e degraus, permite a confirmação de uma experiência bem sucedida.
Grupos de Produtos para Clonagem e Marcadores de ADN
Cepas Bacterianas e Células Competentes
Células competentes prontas para transformação e E. coli.estoques de glicerol de
Cloning Vectors and Kits
Includes an array of cloning and subcloning vectors, and the convenient Flexi® Cloning Systems for protein expression.
Marcadores de Peso Molecular
Marcadores de DNA em uma variedade de tamanhos e formatos, incluindo marcadores de bancada e step ladders. Inclui marcadores de RNA e proteína.
Molecular Biology Enzymes and Reagents
Find ligases, polymerases, PNK, phosphatases, nucleases and more.
Enzimas de Restrição
Enzimas de qualidade e desempenho testado para suas necessidades rotineiras de clonagem.
Principais produtos de clonagem e marcadores de DNA para o seu laboratório
T4 DNA Ligase
Une duas fitas de dsDNA com extremidades coesas ou cegas usando os grupos 5'-fosfato e 3'-hidroxila de nucleotídeos adjacentes.
M1801, M1804, M1794
Single Step (KRX) Competent Cells
Células E. coli ideais para a expressão de proteínas recombinantes, oferecendo transformação eficiente e expressão regulada de proteínas.
L3002
BenchTop 1kb DNA Ladder
Treze fragmentos de 250-10.000 pb pré-misturados com corante de carga.
G7541
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Introdução à clonagem e aos marcadores de DNA
A subclonagem é um procedimento básico em biologia molecular que é utilizado para mover inserções de um vetor para outro para obter a funcionalidade desejada e para caraterizar uma sequência de DNA de interesse.
Um método para efetuar a transferência de uma inserção de DNA utiliza enzimas de restrição para digerir tanto o fragmento como o vetor alvo, que é normalmente um plasmídeo. A confirmação de uma digestão bem sucedida é efectuada através da comparação do tamanho esperado das amostras digeridas com os fragmentos de marcadores de DNA. Para o efeito, as amostras são colocadas em géis de agarose para separar os fragmentos de DNA por tamanho. A T4 DNA Ligase é então utilizada para "colar" o fragmento desejado no plasmídeo digerido.
O passo seguinte é a transformação. A transformação de bactérias com plasmídeos é importante porque as bactérias são utilizadas como meio de armazenamento e replicação de plasmídeos. As células de E. coli têm maior probabilidade de incorporar DNA estranho se as suas paredes celulares forem alteradas de modo a que o DNA possa passar mais facilmente. Essas células são consideradas competentes. A seleção de células que foram transformadas com sucesso é feita através da seleção com antibióticos para o plasmídeo de interesse.
Existem muitas opções para confirmar se a transferência foi bem sucedida, incluindo a PCR, a digestão com enzimas de restrição ou a sequenciamento. Uma vez confirmada, o vetor recombinante pode ser utilizado para uma variedade de aplicações, como a expressão de proteínas ou a transcrição de RNA.
