Glucose Uptake-Glo™ Assay

Medição da Captação de Glicose

O metabolismo da glicose é um processo fundamental em muitos organismos. A falta de captação de glicose estimulada pela insulina está associada ao diabetes tipo 2, enquanto a alta captação de glicose é um sinal das altas taxas glicolíticas associadas ao câncer. A medição da captação de glicose pode determinar os efeitos de vários tratamentos para diabetes e câncer.

O método padrão ouro de avaliação da captação de glicose baseia-se na detecção de análogos de glicose marcados com rádio. Os ensaios colorimétricos e fluorométricos alternativos de captação de glicose geralmente não têm a sensibilidade e a robustez necessárias para medir de forma confiável a captação de glicose nas células.

Um Ensaio Simples e Não-Radioativo de Captação de Glicose

O ensaio Glucose Uptake-Glo™ é um método bioluminescente homogêneo em placas para medir a captação de glicose nas células, com base na detecção de 2-desoxiglicose-6-fosfato (2DG6P).

Protocolo simples e homogêneo: Após a adição de 2DG, não há etapas de lavagem - todas as etapas são adições.
Sensível com ampla linearidade: O ensaio Glucose Uptake-Glo™ pode detectar de 0,5 a 30 µM de 2DG6P e gera uma relação sinal/retorno > 3 com apenas 5.000 células.
Compatível com automação: O formato "add-mix-measure" é compatível com o fluxo de trabalho automatizado e de alto rendimento; as reações são escalonáveis para uso em placas de 96 e 384 poços.
Confiável e reproduzível: O ensaio Glucose Uptake-Glo™ produz fatores Z > 0,5

"Os produtos da Promega são confiáveis e podem ser comprados sem qualquer hesitação. Meu experimento correu muito bem, como esperado, e temos mais planos de realizar experimentos de captação usando o ensaio Glucose Uptake-Glo™."

Dr. Vivek Pandey, Postdoctoral Scholar, University of Kentucky.

Uma comparação do ensaio Glucose Uptake-Glo™ com o método radioativo convencional

A 2-desoxiglicose (2DG) é transportada para as células e fosforilada para produzir 2-desoxiglicose-6-fosfato (2DG6P). A adição do tampão de parada interrompe o transporte de 2DG, lisa as células, destrói qualquer NADPH dentro das células e inativa as proteínas. A adição do tampão de neutralização neutraliza a solução antes da adição do reagente de detecção 2DG6P. A glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PDH) contida no reagente oxida o 2DG6P a 6-fosfodeoxigluconato (6PDG) e reduz o NADP+ a NADPH. A redutase usa o NADPH para converter a proluciferina em luciferina, que é então usada pela luciferase para produzir luz.

Meça as Alterações Metabólicas em Linhas de Células de Câncer e Adipócitos

Células de Câncer MCF7

No modelo de câncer, quando as células são privadas de oxigênio, as condições hipóxicas mudam o metabolismo celular da fosforilação oxidativa para a glicólise. Isso resulta no aumento da captação de glicose.

As células MCF7 cultivadas sob hipóxia (1% de oxigênio) mostram um aumento na captação de glicose-Glo™, indicando um aumento na taxa glicolítica. As mesmas células não demonstram alteração significativa na viabilidade usando os ensaios RealTime-Glo™ e CellTiter-Fluor™.

Células de Adipócitos

Using the adipocyte model, we demonstrate that changes in glucose uptake for 3T3L1-MBX adipocytes did not have significant effects on cell health. Multiplexing the RealTime-Glo™ Assay with the Glucose Uptake-Glo™ Assay separates immediate effects on glucose uptake from global effects on cell health.

13506MB-W-a — Results of the Glucose Uptake-Glo™ Assay when adipocyte cells are treated under various conditions, where "None" indicates the basal level of glucose uptake. Insulin induces translocation of glucose transporters to the cell surface, and thus increases glucose uptake above basal levels. Cytochalasin B is a glucose transporter inhibitor which decreases glucose uptake. LY294002, a phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) inhibitor, is an essential insulin signaling enzyme which decreases glucose uptake relative to insulin alone.

13506MB-W-b — Results of the RealTime-Glo™ Assay when adipocyte cells are treated under various conditions, where "None" indicates the basal level of glucose uptake. Although there are dramatic changes in glucose uptake, as seen in the accompanying panel, there are minimal changes in viability as measured by the RealTime-Glo™ Assay.

FAQs

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Protocolos

Complete Protocol

Glucose Uptake-Glo™ Assay Technical ManualPDF (2409 KB) – English

What's in the box?

Item	Código	Tamanho
Luciferase Reagent	J151A	1 × 5ml
Stop Buffer	J152A	1 × 15ml
Neutralization Buffer	J153A	1 × 15ml
NADP+	J154A	1 × 50μl
G6PDH	J155A	1 × 125μl
2DG	J156A	1 × 250μl
2DG6P Standard	J157A	1 × 50μl
Reductase	G884C	1 × 25μl
Reductase Substrate	G885A	1 × 55μl

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U.S. Pat. Nos. 9,273,343 and 9,951,372, European Pat. No. 2751089, Japanese Pat. No. 6067019 and other patents pending.

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Item	Código	Tamanho	Concentration
Luciferase Reagent	J151B	1 × 10ml
Stop Buffer	J152A	1 × 15ml
Neutralization Buffer	J153A	1 × 15ml
NADP+	J154B	1 × 100μl
G6PDH	J155B	1 × 250μl
2DG	J156A	1 × 250μl
2DG6P Standard	J157A	1 × 50μl
Reductase	G884A	1 × 55μl	6mg/ml
Reductase Substrate	G885A	1 × 55μl

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Item	Código	Tamanho	Concentration
Luciferase Reagent	J151C	1 × 50ml
Stop Buffer	J152A	1 × 15ml
Neutralization Buffer	J153A	1 × 15ml
NADP+	J154C	1 × 500μl
G6PDH	J155C	1 × 1.25ml
2DG	J156A	1 × 250μl
2DG6P Standard	J157A	1 × 50μl
Reductase	G884B	1 × 275μl	6mg/ml
Reductase Substrate	G885A	1 × 55μl

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Recursos

Artigos

High-pressure oxygen rewires glucose metabolism of patient-derived glioblastoma cells and fuels inflammasome response

Part Numbers: J1341, J1342, J1343

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