Análise de ADN forense: Fluxos de trabalho de sequenciação maciçamente paralela
A sequenciação maciçamente paralela (MPS) oferece uma solução para os maiores desafios enfrentados pelos métodos de EC, tais como distinguir a verdadeira variação alélica dos artefactos de PCR, interpretar misturas e obter perfis utilizáveis a partir de ADN degradado. No entanto, a adoção de uma nova tecnologia pode ter desafios únicos. A família de produtos PowerSeq® pode ajudar a tornar a transição mais suave.
Os produtos PowerSeq® permitem a amplificação alvo da região de controlo mitocondrial e de sequências mitocondriais completas. Além disso, os produtos PowerSeq® podem amplificar repetições curtas em tandem (STRs) no cromossoma Y e no ADN autossómico para preparar bibliotecas de sequenciação Illumina® para análise MPS.
Sistema PowerSeq® Whole Mito
Fluxo de trabalho simplificado para uma análise completa do mtDNA
O sistema PowerSeq® Whole Mito gera 161 pequenos amplicons que abrangem toda a região do genoma mitocondrial. As regiões-alvo para amplificação foram concebidas para um tamanho médio de 167 pb, de modo a garantir resultados óptimos a partir de amostras degradadas. O sistema contém reagentes para a preparação de bibliotecas e um fluxo de trabalho optimizado que reduz significativamente o número de passos e o tempo necessário para produzir bibliotecas prontas para sequenciação.
Sistema aninhado PowerSeq® CRM, personalizado
Preparação simplificada de bibliotecas para análise de mtDNA
O PowerSeq® CRM Nested System, Custom, gera 10 pequenos amplicons que cobrem a região de controlo do genoma mitocondrial numa única reação multiplex. Esta técnica melhora os resultados de amostras degradadas. O fluxo de trabalho simplifica muito a preparação da biblioteca, poupando tempo, diminuindo a perda de amostras e reduzindo a variabilidade dos dados.
Sistema PowerSeq® 46GY
Painel optimizado de loci para análise STR
O sistema PowerSeq® 46GY oferece a mesma sensibilidade que os kits de amplificação STR. Pode ser utilizado para preparar bibliotecas MPS e gerar dados de sequenciação compatíveis com a tecnologia de sequenciação Illumina®. O kit permite a identificação de variantes de sequência em loci autossómicos e Y-STR conhecidos, de modo a que os dados gerados sejam utilizáveis e interpretáveis de acordo com as directrizes actuais.
Sistema PowerSeq® Quant MS
Preparação consistente de bibliotecas para análise de STR
O sistema PowerSeq® Quant MS é um sistema baseado em qPCR concebido para a quantificação de bibliotecas antes da sequenciação no sistema Illumina® MiSeq®. A quantificação exacta da biblioteca proporciona uma representação equilibrada das bibliotecas agrupadas e reduz a tendência de sequenciação.
Grupos de Produtos de Sequenciação Massivamente Paralela
Preprocessing and Differential Extraction
Reagents to help you pretreat swabs and storage card punches prior to direct amplification, preprocess challenging casework samples and easily separate sperm and epithelial cells.
DNA Isolation
DNA extraction systems that allow you to yield pure, intact DNA and save time with automation.
Human Specific DNA Quantitation
Systems to help you determine human genomic DNA concentration prior to STR amplification, assess DNA integrity and detect PCR inhibitors.
Target Amplification and Library Prep
Reagents to facilitate library prep and amplification of the mitochondrial control region.
Sequenciação maciçamente paralela para análise de ADN forense
Tradicionalmente, a eletroforese capilar (CE) tem sido o método de eleição para a análise de repetições curtas em tandem (STR) para identificação humana. Embora os métodos de EC continuem a evoluir em termos de aumento da sensibilidade e da capacidade de trabalhar com ADN degradado ou de má qualidade, a técnica ainda enfrenta alguns desafios.
A sequenciação de nova geração (NGS), ou sequenciação maciçamente paralela (MPS), permite a análise simultânea de centenas de marcadores genéticos, consideravelmente mais do que as actuais tecnologias de EC. Para além de fornecer informações sobre o tamanho das regiões repetidas, como faz a EC, a MPS determina a sequência de ADN subjacente de cada região. Ao fazer isso, a MPS oferece uma solução para os maiores desafios enfrentados pelos métodos de EC, como distinguir a verdadeira variação alélica dos artefatos de PCR, interpretar misturas e obter perfis utilizáveis de DNA degradado.
Uma aplicação popular das MPS na área forense é a sequenciação de ADN mitocondrial - quer a região de controlo variável, quer todo o genoma mitocondrial - com maior deconvolução de misturas e resolução de heteroplasmia em comparação com os métodos tradicionais. Embora a adoção de fluxos de trabalho MPS pelos laboratórios forenses tenha sido lenta, a tecnologia é muito promissora para aumentar a precisão e o rendimento da análise do ADN forense. Os futuros avanços na MPS para baixar ainda mais o custo incentivarão uma adoção mais generalizada e a consequente validação dos métodos forenses de MPS.
