Interacções de proteínas
Oferecemos uma série de produtos para a análise de interacções proteicas, incluindo ensaios pull-down, sistemas baseados em BRET e sistemas baseados em repórteres de complementação.
Os sistemas pull-down GST são utilizados em métodos tradicionais baseados em extractos de células e/ou expressão sem células. O sistema HaloTag® Mammalian Pull-Down System é utilizado para isolar e identificar complexos proteicos intracelulares a partir de células de mamíferos.
As tecnologias NanoBRET™ e NanoBiT® fornecem métodos para a análise direta de interacções proteicas em células vivas. O sistema NanoBRET™ utiliza a transferência de energia por ressonância de bioluminescência (BRET) num ensaio baseado na proximidade que detecta interacções proteicas medindo a transferência de energia de um dador de proteína bioluminescente para um aceitador de proteína fluorescente.
Os ensaios NanoBiT® assentam num sistema de duas subunidades baseado na luciferase NanoLuc® que pode ser utilizado para a deteção intracelular de interacções proteína:proteína. As subunidades são fundidas com proteínas de interesse, formando uma enzima funcional que gera um sinal brilhante e luminescente quando as proteínas interagem.
Grupos de produtos de interacções de proteínas
Live-Cell Protein Interactions
BRET and complementation reporter methods for detection of protein interactions close to endogenous expression levels.
Pull-Down and Two-Hybrid Systems
Resin- and magnetic-based systems for isolating GST or HaloTag fusion proteins.
Lumit® Anti-Tag PPI Reagents
Homogeneous assay to measure protein-protein or protein-small molecule interactions involving tagged proteins.
Principais produtos de interação de proteínas para o seu laboratório
HaloTag® Mammalian Pull-Down Systems
These systems enable rapid capture of simple or complex protein pairs directly from lysates and allow you to go from pull-downs to imaging studies using same construct.
G6509, G6500, G6504, G6591
NanoBiT® PPI Starter Systems
Complementation reporter for detection of protein interactions in live cells.
N2014, N2015, N2016
NanoBRET® PPI Starter Systems
Live-cell protein:protein interaction assay. Includes vectors, controls and detection reagent for BRET-based PPI.
N1811, N1821
Uma introdução às interacções entre proteínas
As interacções proteína:proteína (PPI) são essenciais para quase todos os processos numa célula, pelo que a compreensão das PPI é crucial para entender a biologia celular em estados normais e de doença. Existem numerosos métodos utilizados para caraterizar as interacções proteicas que utilizam extractos de células ou células vivas para expressar potenciais alvos.
Num ensaio pull-down, um parceiro proteico é expresso como uma proteína de fusão (por exemplo, proteína isco) em E. coli e depois imobilizado utilizando um ligando de afinidade específico para a etiqueta de fusão. A proteína isco imobilizada pode então ser incubada com a proteína presa.
A co-imunoprecipitação é outra opção para estudar as interacções proteína:proteína. Para efetuar a co-imunoprecipitação, um anticorpo contra uma proteína-alvo é acoplado a esférulas Sepharose® através da proteína A ou G e, em seguida, os complexos que contêm a proteína-alvo são imunoprecipitados com as esférulas acopladas ao anticorpo.
No entanto, estes métodos tradicionais de estudo das interacções entre proteínas não fornecem dados diretamente no contexto de um ambiente celular. Utilizando a transferência de energia de ressonância de bioluminescência (BRET) ou ensaios de complementação, é possível medir quantitativamente a interação entre proteínas em células vivas.
