Purificação de proteínas
A purificação de proteínas é fundamental para o estudo da função das proteínas e envolve uma série de processos para expressar, enriquecer e purificar uma proteína de interesse a partir de uma mistura complexa, como o lisado celular. O método mais rápido e mais poderoso para este fim é a purificação por afinidade. Oferecemos uma gama de kits de purificação de proteínas e reagentes para a purificação de proteínas recombinantes utilizando etiquetas de afinidade como HaloTag, GST- ou His-tag. Também oferecemos Magne® Protein G/A Beads, que proporcionam um método rápido e fácil de utilizar para a purificação de anticorpos policlonais e monoclonais a partir de soro, líquido de ascite e meio de cultura celular.
Principais produtos de purificação de proteínas para o seu laboratório
Magne® Protein G and Magne® Protein A Beads
Magnetic affinity beads with Protein A or G for Ab purification from culture media, ascites and serum samples.
G7471, G7472, G7473, G8781, G8782, G8783
High Capacity Magne® Streptavidin Beads
Magnetic affinity beads for binding biotinylated antibodies and proteins from complex biological samples with low nonspecific binding.
V7820, V7830
Magne® HaloTag® Beads
Magnetic capture of HaloTag® fusion proteins for protein pull-downs and purification. Magnetics enable streamlined protein purification, eliminate multiple centrifugation steps.
G7281, G7282
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Noções básicas de purificação de proteínas
A purificação de proteínas é um passo fundamental para analisar proteínas individuais e complexos proteicos. A Escherichia coli continua a ser a primeira escolha de muitos investigadores para a produção de proteínas recombinantes devido à facilidade de utilização, ao rápido crescimento celular e ao baixo custo da cultura. As proteínas expressas em E. coli podem ser purificadas em quantidades relativamente elevadas, mas estas proteínas, especialmente as proteínas eucarióticas, podem não apresentar uma atividade proteica ou um dobramento adequados. As células de mamíferos em cultura oferecem uma opção alternativa para produzir proteínas de mamíferos corretamente dobradas e funcionais com modificações pós-tradução adequadas.
Para simplificar a purificação, os marcadores de purificação por afinidade podem ser fundidos a uma proteína recombinante de interesse. Os marcadores de fusão comuns são polipéptidos, pequenas proteínas ou enzimas adicionados ao terminal N ou C de uma proteína recombinante. O primeiro passo na purificação de uma proteína recombinante é a preparação do lisado ou sobrenadante celular. No caso das proteínas segregadas, é necessária uma preparação mínima do sobrenadante, seguida de ligação selectiva, lavagem e eluição da proteína purificada. Após a purificação, a proteína pode ser clivada com uma protease para remover a etiqueta de afinidade.
