Análise de ARN

Os produtos para análise de RNA incluem corantes fluorescentes para quantificação de RNA, reagentes de transcrição in vitro, enzimas e kits de RT-PCR e vectores para gerar shRNA para utilização em experiências de interferência de RNA.

Os produtos de RT-PCR da Promega incluem transcriptases reversas autónomas (AMV, M-MLV e GoScript) e uma gama de kits completos que contêm todas as enzimas, tampões e reagentes necessários para uma RT-PCR bem sucedida. 

Os reagentes para a transcrição in vitro incluem sistemas de produção de ARN em grande escala (RiboMAX) e sistemas para a geração de sondas de ARN (Riboprobes). 

O ARN é notoriamente suscetível à atividade de nuclease. O inibidor de ribonuclease Promega RNasin é o padrão de ouro utilizado por investigadores de todo o mundo para proteger o ARN da degradação por nuclease.

Introdução à análise de ARN

As espécies de ARN (ARN mensageiro, ARN de transferência, ARN ribossómico) desempenham funções essenciais na tradução da informação genética do ADN em proteínas. Mais recentemente, foram descritos novos papéis para os microARN e outros pequenos ARN não codificantes na regulação da expressão genética.  A investigação em análise de ARNabrange uma vasta gama de tópicos—desde a análise em grande escala do transcriptoma—o conjunto completo de transcrições de ARN codificadas por um genoma—até ao estudo das acções de pequenos ARN não codificantes individuais em genes específicos. ;

A transcrição in vitro é o processo pelo qual o ARN é gerado a partir de um modelo de ADN no laboratório. Os sistemas de transcrição in vitro são utilizados para gerar ARN a partir de modelos de ADN para utilização em aplicações como a tradução in vitro, o estudo de vírus de ARN e estudos de interação ARN:proteína. Os sistemas Riboprobe® são utilizados para preparar sondas de ARN de cadeia simples, quantidades de microgramas de transcrições de ARN definidas e ARN anti-sentido para utilização em estudos de análise de ARN. 

A RT-qPCR é uma técnica essencial para a análise da expressão genética. Os sistemas de RT-qPCR são utilizados para detetar e monitorizar a expressão de alvos específicos de ARN em tempo real durante uma experiência.

As RNases (enzimas que degradam o ARN) são omnipresentes. É fundamental isolar com êxito o ARN e manter a sua integridade, especialmente quando são utilizadas aplicações sensíveis a jusante (por exemplo, sequenciação de ARN). Toda a purificação e manuseamento de ARN devem ser efectuados numa zona do laboratório livre de RNase e apenas de ARN, devendo ser sempre utilizadas luvas para evitar contaminações acidentais. A utilização de um inibidor de RNase pode ajudar a proteger as suas amostras da degradação da RNase.