Sequenciação: NGS e Sequenciação Sanger
Nos fluxos de trabalho de sequenciação de nova geração, o ácido nucleico é extraído de uma amostra e fragmentado, organizado em construções de bibliotecas específicas da plataforma, amplificado e sequenciado. Independentemente do tipo de amostra ou da plataforma utilizada, cada etapa desse fluxo de trabalho é fundamental para o sucesso dos resultados.
Os produtos da Promega para apoiar os fluxos de trabalho de NGS incluem os sistemas ProNex® NGS Quantitation e Size Selective DNA Purification para a preparação de bibliotecas antes da sequenciação, bem como sistemas de extração e quantificação de ácidos nucleicos. O Sistema de Eletroforese Capilar Compacto Spectrum e o Sistema de Sequenciação ProDye™ Terminator suportam aplicações de sequenciação Sanger, como a verificação de chamadas de base NGS e a confirmação de edições de genoma em culturas transformadas.
Grupos de produtos de sequenciação
DNA Extraction for NGS
Manual and automated purification systems to produce the highest quality, NGS-ready DNA.
Quantitation for NGS
Tools for accurate DNA and RNA quantitation, and for quality control of NGS libraries.
NGS Library Prep
DNA size selection and quantification systems.
Sanger Sequencing
Terminator sequencing kit and compact, benchtop CE system designed for Sanger sequencing.
Principais produtos de sequenciação para o seu laboratório
ProDye® Terminator Sequencing System
An improved method of fluorescent Sanger sequencing using a proprietary thermostable DNA polymerase included in the master mix.
CR4324, CR4302, CR4310
ProNex® Size-Selective Purification System
Magnetic resin-based purification of dsDNA for NGS, PCR and general molecular biology applications.
NG2001, NG2002, NG2003
Spectrum Compact CE System
An affordable benchtop instrument for Sanger sequencing and fragment analysis.
CE1304, CE1307, CE1305
Recursos de sequenciação
Introdução ao NGS e à Sequenciação Sanger
Da ciência básica à investigação translacional, a sequenciação de nova geração (NGS, também conhecida como sequenciação paralela massiva) abriu novas vias de investigação em genómica, oncologia e ecologia. A disponibilidade da tecnologia NGS tornou a sequenciação uma opção rotineira e viável para investigações de diagnóstico, forenses e epidemiológicas e permitiu avanços em muitas aplicações de análise genómica.
Na sequenciação de Sanger (sequenciação de primeira geração), os fragmentos de ADN são sequenciados através da incorporação de nucleótidos de terminação de cadeia, que são depois separados por eletroforese e detectados por um sinal fluorescente. Na NGS, milhões de fragmentos de ADN são sequenciados em paralelo e os nucleótidos são detectados à medida que são adicionados à cadeia de ADN. Após a extração e fragmentação do ADN, os clusters de cada modelo de ADN são amplificados por PCR e fixados a uma superfície sólida. São então interrogados com nucleótidos e visualizados/medidos à medida que o ADN é sequenciado.
Existem várias tecnologias NGS disponíveis: Os sequenciadores Illumina utilizam nucleótidos marcados com corante terminador reversível para interrogar o ADN capturado. Assim que cada base é lida, o terminador e o corante são removidos por clivagem e lavagem, criando um nucleótido normal. A cadeia é novamente extensível e o processo é repetido para continuar a sequenciação ao longo da cadeia. Em vez de utilizar nucleótidos marcados com corante, o sequenciador Ion Torrent mede a libertação de iões de hidrogénio após a incorporação da base e o sistema 454 mede a luminescência após a incorporação do nucleótido. Estes sequenciadores podem processar um grande número de amostras em paralelo, aumentando a velocidade e o rendimento e tornando possível e acessível a sequenciação de genomas completos em prazos curtos.
