Expressão de proteínas

Os sistemas de expressão sem células mais frequentemente utilizados têm origem em reticulócitos de coelho, gérmen de trigo e E. coli. Existem dois tipos de sistemas de expressão sem células baseados em reticulócitos de coelho: Sistemas de tradução e sistemas acoplados de tradução e transcrição (TNT®). Ambos fornecem os componentes macromoleculares necessários para a tradução, tais como ribossomas, tRNAs, aminoacil-tRNA sintetases, factores de iniciação, alongamento e terminação. A síntese de proteínas pode ser efectuada em poucas horas utilizando modelos de ARNm em sistemas de tradução ou modelos de ADN (ADN plasmídico ou fragmentos de PCR) em sistemas acoplados de transcrição e tradução.

O sistema T7 RNA Polimerase é a abordagem mais popular para a produção de proteínas em E. coli. Neste sistema, um vetor de expressão que contém um gene de interesse, clonado a jusante do promotor T7, é introduzido num hospedeiro de expressão T7. Os hospedeiros de expressão T7, como as estirpes DE3, têm uma cópia cromossómica do gene da polimerase do ARN do fago T7. Quando um indutor como o IPTG ou a ramnose é adicionado à cultura, a T7 RNA polimerase é expressa e transcreve o gene de interesse, seguido da tradução da proteína desejada pela maquinaria endógena de tradução de proteínas. A Promega oferece células competentes prontas a usar para a expressão de proteínas recombinantes em E. coli.